NAD蘋果酸酶(NADME)測(cè)試盒

商品詳情：
NAD蘋果酸酶(NADME)測(cè)試盒測(cè)定意義：

ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物ME活性測(cè)定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

測(cè)定原理：

NADP-ME催化NADP+還原成NADPH，在340nm下測(cè)定NADPH增加速率。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
樣品中AA提取：

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來(lái)水冷卻后，8000g，，4℃離心10min，上清液置冰上待測(cè)。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3.血清等液體：直接檢測(cè)。

計(jì)算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計(jì)算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬(wàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測(cè)定的吸光值過(guò)高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰，因此，570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4．檢出限為100μmol/L。

分離蛋白3ELISA試劑盒 SCRN3免費(fèi)代測(cè)試劑

分離蛋白2ELISA試劑盒 SCRN2免費(fèi)代測(cè)試劑

分離蛋白1ELISA試劑盒 SCRN1免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白9ELISA試劑盒 SNX9免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白8ELISA試劑盒 SNX8免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白7ELISA試劑盒 SNX7免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白6ELISA試劑盒 SNX6免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白5ELISA試劑盒 SNX5免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白4ELISA試劑盒 SNX4免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白3ELISA試劑盒 SNX3免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白2ELISA試劑盒 SNX2免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白19ELISA試劑盒 SNX19免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白17ELISA試劑盒 SNX17免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白16ELISA試劑盒 SNX16免費(fèi)代測(cè)試劑

分揀連接蛋白15ELISA試劑盒 SNX15免費(fèi)代測(cè)試劑
NAD蘋果酸酶(NADME)測(cè)試盒土壤蔗糖酶(S-SC)測(cè)試盒/微量法100管/48樣

土壤脂肪酶(S-LPS)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣

土壤脂肪酶(S-LPS)測(cè)試盒/微量法100T/96S

土壤植酶測(cè)試盒/分光光度法50T/24S

土壤植酶測(cè)試盒/微量法100T/48S

土壤中性(S-NPT)測(cè)試盒/分光光度法50管/24樣

土壤中性(S-NPT)測(cè)試盒/微量法100管/48樣

土壤中性磷酶(S-NP)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣

土壤中性磷酶(S-NP)測(cè)試盒/微量法100T/96S